方法一: 使用OriginPro 2021軟件計算競爭法試劑盒ELISA結果

第一步：我們以PG(Progesterone) ELISA Kit?這個試劑盒為例

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將標曲的數據復制粘貼在如下表框中

按下Ctrl+A鍵全選然后鼠標依次單擊，Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

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在Function Selection選項卡中，將 Category 參數設置為?Statistics

將Function參數設置為?Logistic

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在Find X/Y選項卡中對?Find X from Y?進行勾選，然后單擊?Fit?鍵

橫縱坐標選擇Log10參數，注意from?/ to 的上下限值的選擇，完成后單擊OK?鍵

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最后結果計算，競爭法由于OD值與樣品濃度成反比關系，所以不需要減去零孔背景值，如果是夾心法的試劑盒，則還需要事先在excel中減去背景值然后再依據教程進行計算。

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方法二：使用Curve ?Expert1.4軟件

標準曲線的繪制?

可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線，下面以“Curve ?Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標準曲線的方法如下；

1．啟動“Curve? Expert”

2．X軸輸入標準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖：

3．單擊[運行]??按鈕，出現如下對話框

4．單擊[ok]按鈕，出現如下兩個對話框，關閉下面一個對話框

5. 在對話框的右上角出現一些曲線的名稱，從“1”開始依次點擊曲線名稱，在右下角會出現相應擬合的曲線。

（一般選擇第一個多項式擬合）

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6. 根據擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊，出現如下對話框：

注意：選擇系數（即“r”值）最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框

右上角有“r”值?，當“r”值越接近1擬合度越好

7．按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現如下對話框：

8．輸入標準的OD值，單擊[Calculate]按忸，即可得到待測蛋白的實際含量（標本稀釋了N倍，運算出的數值應在乘以N）。

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9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程，可在步驟6的對話框空白處右擊，選擇”Information”

10. 得到如下對話框：點擊“Copy”

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在你需要的位置粘貼即可得到如下數據：

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =?? -21.531017

b =? 212.05019

c =? -0.24054479

d =? 0.018060778

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11. 修改作圖中X,Y坐標軸高度以及相關屬性

選擇步驟9所示圖中的第二排“Graph Properties”，修改好后點擊OK保存